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发光法直接检测过氧化氢(HyPerBlu)

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HPB-00005 5ml 2-8℃ 1年 原装进口
HPB-1000 1000ml 2-8℃ 1年 原装进口

产品特点:
直接检测过氧化物、氧化酶以及其底物;
稳定的单组份即用型试剂,使用极其方便;
宽线性动态检测范围,高强度持续发光;
在液相检测中具有最优异的灵敏度。
  产品名称:Lumigen HyperBlu(发光法直接检测过氧化氢底物)

产品描述:
直接检测H2O2,氧化酶及其底物,宽线性动态检测范围,高强度持续发光(超过5个数量级),在液相检测中具有极高的灵敏度。

Lumigen HyPerBluTM 是一种新颖的即用型化学发光底物。在碱性条件下, 该底物与过氧化氢反应, 迅速而持续地产生高强度发光, 可以极其敏感地检测样品中过氧化氢浓度。由于氧化酶能催化其底物产生过氧化氢, Lumigen HyPerBluTM 也可用于一步法间接定量检测各种氧化酶或其底物的浓度。

Lumigen HyPerBlu适合于自动化和小型化操作 (如加在384孔或1536孔的微孔板孔内); 是单组份即用型试剂; 具有很好的兼容性 (不受常用的溶剂, 比如二甲基亚砜等影响); 无需中间标记物 (如HRP标记物); 具有化学特异性强和卓越的稳定性等特点。 Lumigen HyPerBlu的这些特点可保证检测简单,高效和方便,尤其适用于实验室大量筛选 (比如筛选调节细胞产生过氧化氢和氧化压力的药物)。

产品技术:
Lumigen HyPerBlu是一种新的化学发光底物, 与过氧化物直接反应(无需过氧化物酶),快速产生持续性的高强度化学发光; 发光信号强度可通过基于PMT的微孔板式发光分析仪或者CCD成像系统检测。

大量筛选试验对检测技术提出各种各样的挑战。自发性荧光化合物、生物性媒介物和待测物标记等因素都会负面影响检测方法的高效和可靠。与传统的荧光过氧化物酶检测过氧化氢的方法相比,Lumigen HyPerBlu 具有更多优势。其长期稳定性和宽线性动态检测范围(大于5个数量级),使得该试剂具有更高德灵敏度和更好的重复性。因为直接检测过氧化物而非依赖酶促反应,检测受到的干扰大为减少。

反应机理:

图1. Lumigen HyPerBlu 试剂反应机理: 在碱性条件下, 鲁米根专利产品Lumigen BPD (双氧杂化烷亚硼酸)与待测样品中的过氧化氢反应, 迅速而持续地产生高强度发光, 光的强度与过氧化氢浓度成线性关系。


图2. 高灵敏度宽线性动态检测过氧化氢 (超过5个数量级的检测范围): 在96孔白色微孔板中, 每孔加入50 μL梯度稀释的尿过氧化物酶, 每个稀释浓渡加三孔, 随后向每孔加入50 μL的 Lumigen HyPerBlu 试剂,反应24分钟时检测结果。


图3. 试剂稳定性: Lumigen HyPerBlu 试剂在室温下存放(约23 °C), 每周与新鲜配制的HyPerBlu试剂对比检测同一样品, 存放达31天的与新配制的无异,检测信号保留在95%以上。

间接检测氧化酶或氧化酶底物:
检测酶促反应产生的过氧化氢越来越多地被用来研究氧化应激反应对各种生物功能和生理作用的影响。不同与使用特异底物加辣根过氧化物酶标记的荧光素等传统方法, Lumigen HyPerBlu 化学发光试剂提供一种非标记,无需酶的,检测氧化酶活性或氧化酶底物的新技术。

该技术直接检测氧化酶促反应产生的过氧化氢,方法简单灵活,无需复杂的标记过程。在有过量的氧化酶底物存在时,化学发光信号与氧化酶的量和活性成正比;在氧化酶的量固定而底物的量变化时, 化学发光信号则与底物的量成正比; 所以Lumigen HyPerBlu可用于一步法间接检测氧化酶或氧化酶底物。


图4. 一步法检测葡萄糖氧化酶:梯度稀释的葡萄糖氧化酶加在微孔板中, 每个稀释浓渡加四孔,每孔加入等量葡萄糖,室温孵育30分钟,最后加入Lumigen HyPerBlu试剂,反应24分钟时检测结果。


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